開展無菌檢查和微生物極限檢查，首先要按照《藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范》和《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，建立布局合理、使用方便、操作安全的無菌室，并配備完善的實(shí)驗(yàn)設(shè)施和管理體系。無菌檢查、微生物極限檢查和疫苗接種室(疫苗接種對(duì)照菌)應(yīng)嚴(yán)格分離，危險(xiǎn)毒株、破傷風(fēng)梭菌、黃曲霉毒素等毒素應(yīng)單獨(dú)使用，以控制和防止傳播。

　　(一)潔凈實(shí)驗(yàn)室。

　　1.潔凈室布局。

　　根據(jù)樣品檢驗(yàn)要求，至少應(yīng)包括更衣緩沖系統(tǒng)、微生物極限檢查室、無菌檢查室、陽性菌室和物流通道。

　　更衣系統(tǒng)應(yīng)至少包括一更(含更鞋)、二更(含洗手)、緩沖和人流走廊等。

　　物流通道應(yīng)考慮污水凈化分流的布局，有條件的可設(shè)置污水走廊。

　　2.潔凈室的設(shè)計(jì)要求。

　　凈化等級(jí)：潔凈走廊。檢查室。陽性菌室應(yīng)為1萬級(jí);其他房間應(yīng)為10萬級(jí)。

　　氣流組織:陽性菌室對(duì)走廊負(fù)壓，走廊正壓緩沖5Pa;陽性菌室全排氣電氣控制:外置控制開關(guān);設(shè)置通信系統(tǒng)。

　　3.結(jié)構(gòu)和要求。

　　無菌潔凈室不宜位于底層，防潮、防霉、采光好，遠(yuǎn)離交通主干道、衛(wèi)生間、污染區(qū)，面積不超過10m2，高度不超過2.4m，由兩個(gè)緩沖室和操作室組成。操作室緩沖之間應(yīng)有樣品傳送窗，進(jìn)出操作室和緩沖室之間的門不應(yīng)直接對(duì)齊。無菌室六面光滑平整，無縫隙，無灰塵，無灰塵，耐腐蝕，易清洗，墻面與地面。墻壁與天花板的連接處應(yīng)為凹弧形，操作室不得安裝下水道。

　　無菌室內(nèi)照明燈應(yīng)嵌入天花板內(nèi)，采光面積大，光照分布均勻，光照度不低于300勒克斯。緩沖室和手術(shù)室應(yīng)配備紫外線殺菌燈(2-25w/m3)，用于空氣消毒。紫外線波長200-300nm的具有殺菌作用，其中265-266nm殺菌效果強(qiáng)，與DNA吸收光譜范圍一致。其殺菌機(jī)制可能是在細(xì)菌細(xì)胞DNA中形成胸腺嘧啶雙聚體，從而干擾細(xì)菌細(xì)胞DNA的復(fù)制，導(dǎo)致細(xì)菌變異死亡。紫外線殺菌燈距離1m以內(nèi)殺菌效果好，每次開燈照射時(shí)間為30min。紫外線燈的輻射強(qiáng)度應(yīng)定期檢查，距離不應(yīng)小于70μWcm-21m。缺點(diǎn)是穿透力弱，紙板可以阻礙光線的通過，不能穿透固體物體，只能用于表面消毒和一些不耐熱或化學(xué)消毒劑的消毒。

　　4.溫度。

　　無菌室內(nèi)溫度和相對(duì)濕度直接影響紫外線殺菌燈的殺菌效果，因此溫度控制在25±2℃，相對(duì)濕度為40-60%。手術(shù)室或凈化工作臺(tái)的清潔空氣應(yīng)對(duì)環(huán)境保持正壓，不少于49Pa。

　　5.操作室。

　　空氣除菌過濾層流裝置和調(diào)溫裝置應(yīng)安裝在無菌室內(nèi)。

　　潔凈度要求：凈化工作臺(tái)潔凈度100級(jí)，無菌室1萬級(jí)。

　　操作室應(yīng)準(zhǔn)備乙醇燈(或氣燈)、火柴、2%碘酊棉球、75%乙醇棉球、試管架、橡膠乳頭、砂輪、記號(hào)筆、無菌剪刀、鑷子、注射器等。微生物極限檢查無菌室操作室還應(yīng)有電子稱(感覺0.1g，大稱量300g)、電動(dòng)均漿儀等。

　　6.緩沖間。

　　緩沖室內(nèi)應(yīng)有洗手盆、消毒液、無菌衣服、帽子、口罩、拖鞋等緩沖室內(nèi)不得放置培養(yǎng)箱等雜物。

　　(二)使用潔凈室。

　　1.實(shí)驗(yàn)開始前1小時(shí)啟動(dòng)風(fēng)扇系統(tǒng)(空調(diào)系統(tǒng))，空氣消毒裝置至少半小時(shí)關(guān)閉。

　　2.觀察并確保潔凈室的壓差。

　　3.物品通過物流通道進(jìn)入潔凈室。

　　4.人員正確著裝后，通過人流通道進(jìn)入潔凈室。

　　5.使用后，用消毒劑清潔工作臺(tái)。實(shí)驗(yàn)人員在更衣室更換無菌工作服，然后離開清潔工作室。打開空氣消毒裝置，消毒至少半小時(shí)閉清潔工作室的控制開關(guān)。

　　(3)潔凈室的清潔和維護(hù)。

　　1.潔凈室的清潔和維護(hù)分為日常維護(hù)、定期維護(hù)和不合格維護(hù)。

　　2.日常維護(hù)由每次實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行，維護(hù)范圍為潔凈工作室和輔助潔凈區(qū)，維護(hù)頻率為每次實(shí)驗(yàn)后。

　　3.定期維護(hù)由實(shí)驗(yàn)室指定的專人進(jìn)行，維護(hù)范圍為所有清潔工作室，維護(hù)頻率為每兩周一次。

　　4.不合格的維護(hù)由實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行，維護(hù)范圍為所有不合格的潔凈室，維護(hù)時(shí)間為不合格的。

　　(四)潔凈室驗(yàn)證。

　　1.驗(yàn)證項(xiàng)目：

　　清潔度、微生物數(shù)、通風(fēng)次數(shù)、靜壓差、照度、溫度、相對(duì)濕度。

　　2.驗(yàn)證的技術(shù)要求。

　　驗(yàn)證項(xiàng)目10萬級(jí)1萬級(jí)100級(jí)。

　　溫度(℃)18-2620-2420-24。

　　相對(duì)濕度(%)45-6545-6045-60。

　　換氣次數(shù)(次/h)不少于15或25。

　　壓差(pa)相對(duì)于室外:10級(jí)差的潔凈室之間:

　　照度(Lx)主工作室≥300輔助工作室≥150。

　　懸浮粒數(shù)(粒/m3)≥0.5um35000035000≥5um2000020000。

　　5001005浮游菌數(shù)(個(gè)/m3)。

　　1031沉降菌(個(gè)/皿)。

　　3.建議驗(yàn)證周期每半年一次，驗(yàn)證次數(shù)也可根據(jù)潔凈室的使用頻率適當(dāng)增加。

　　4.驗(yàn)證方法的清潔度和微生物數(shù):GB/T16292~16294-1996，其他項(xiàng)目:參考JGJ71-90。

　　5.驗(yàn)證不符合項(xiàng)的處理。

　　當(dāng)潔凈度、微生物數(shù)、通風(fēng)次數(shù)、靜壓差等指標(biāo)不符合時(shí)，應(yīng)停止使用潔凈室。凈化系統(tǒng)調(diào)整后，應(yīng)重新驗(yàn)證，直至符合規(guī)定。

　　當(dāng)溫度、相對(duì)濕度、照度等指標(biāo)不一致時(shí)，潔凈室不需要停止使用，但應(yīng)及時(shí)修復(fù)空調(diào)系統(tǒng)(或更換照明裝置)，使其符合要求。